羊水細胞培養染色體檢查

基本信息

專科分類： 孕產檢查
檢查分類： 基因檢測（DNA）
適用性別： 女性
是否空腹： 　空腹
手術參考價： 150元
科　室： 孕產檢查

羊水細胞培養染色體檢查檢查簡介

由于有害化學物質、X線照射、環境因素影響，高齡妊娠，近親配婚等，導致妊娠時染色體的數目、形態、結構及結合上發生變異所引起的疾病。羊水細胞的染色體檢查，對染色體疾病的產前診斷具有很大的特異性意義。

羊水細胞培養染色體檢查檢查過程

羊水細胞培養染色體檢查的測定原理：羊水細胞是胎兒皮膚、消化道、呼吸道和經生殖泌尿系統脫落的細胞，95%左右是死細胞，因此必須經過細胞培養，使活的細胞得到充分的增殖，才能收獲細胞，進行核型分析。

試劑：①F10培養液（如用RPMI1640，M199需加1mmol/L谷氨酰胺）pH6.5～6.8。②小牛血清。③Hanks平衡鹽溶液（10倍濃縮）：甲液：NaCl80g，KCl4g，MgSO4·7H2O1g，MgCl2·6H2O1g，CaCl2·6H2O1.4g。將CaCl2溶于50ml三蒸水中，其它依次溶于400ml三蒸水中，兩液混合，加三蒸水至500ml，加氯仿1ml混勻，保存于4℃冰箱中。乙液：Na2HPO4·12H2O1.52g，KH2PO40.6g，葡萄糖10.0g，4g/L酚磺酞液50.0ml。依次溶于三蒸水400ml中，加三蒸水至500ml，加入氯仿1ml混勻，保存于4℃冰箱。Hanks平衡工作液：甲液1份，乙液1份，雙蒸水18份，混合后高壓滅菌，置4℃冰箱保存。使用前以50g/LNaHCO3溶液調至適當pH。④4g/L酚磺酞液：酚磺酞0.4g置研缽中研碎，逐滴加入0.05mol/LNaOH22ml。

直到所有顆粒幾乎完全溶解，加入三蒸水至100ml，置棕色瓶中保存。⑤2.5g/L胰蛋白酶溶液：稱取胰蛋白酶250mg，溶于100mlHanks溶液中，過濾除菌，或用無鈣、鎂離子溶液配制。⑥無鈣、鎂離子溶液：NaCl8.0g，KCl0.2g，枸櫞酸鈉1.0g，NaH2PO4·H2O0.05g，NaHCO31.0g，葡萄糖1.0g。依次溶于三蒸水中，最后加三蒸水至1000ml，過濾除菌，貯存于4℃冰箱中備用。⑦EDTA胰蛋白酶溶液：貯存液：NaCl80g，KCl4g，葡萄糖10g，NaHCO35.8g，胰蛋白酶5.0g，EDTA2.0g。依次溶于900ml三蒸水中，并加4g/L酚磺酞5ml，加三蒸水至1000ml，抽濾除菌、分裝，凍存備用。工作液：取貯存液1ml，加無菌三蒸水9ml即可。⑧雙抗溶液。⑨秋水仙素（10μg/ml）。

操作方法：

（1）取孕期16～20周羊水15～30ml，1000r/ml離心10min。

（2）棄去多余上清液，留1ml羊水和沉淀細胞，輕輕打散成細胞懸液。

（3）移入25ml方形培養瓶中，加pH6.5～6.8（含青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml）的培養基3ml及小牛血清1ml，置37℃溫箱中培養。

（4）培養7～10天后可見大量成纖維樣或上皮樣細胞集落。此時可調換新鮮培養液。

（5）待細胞集落擴大成片，并有許多透亮的圓形分裂細胞時，即可加入秋水仙素，使最終濃度為0.1～0.3μg/ml，置37℃溫箱中再培養5～6h（上述過程均在無菌條件下進行）。收獲標準：①以成纖維細胞為主要類型，成片細胞生長；②以10倍目鏡和20倍物鏡觀察，生長的細胞克隆覆蓋1個或1個以上完整視野；③見到10個以上透亮的圓形細胞和10個以上雙圓形光亮的分裂細胞。

（6）如果細胞生長不旺盛，生長周期不齊或細胞老化，未達收獲標準，可在原瓶繼續傳代培養。方法：在無菌條件下先倒去培養液，加入2.5g/L無菌胰蛋白酶液數滴，搖動后倒去。再加入胰蛋白酶5～10滴，在37℃下輕輕搖動約5min，使貼壁細胞脫落。加入含小牛血清的新鮮培養基4ml，在37℃靜置培養4～5h。再小心更換培養液，繼續培養，一般傳代后3～5天即可收獲。

（7）將培養液移至刻度離心管中，加ED-TA-胰蛋白酶液1ml于培養瓶內，置37℃溫箱中5min，然后用彎頭吸管沖洗貼壁細胞（也可用2.5g/L胰蛋白酶溶液消化）。將脫離瓶壁的細胞倒入離心管中，與原培養液相混合，并用少量溫熱生理鹽水沖洗培養瓶，洗下的細胞也一并倒入該離心管，以1000r/min離心10min。

（8）吸棄上清液，加入預溫37℃的0.075mol/LKCl低滲液3～5ml，置37℃10～15min。

（9）預固定、固定及制片均與外周血細胞染色體標本的制備法相同。

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